米根霉(Rhizopus oryzae)脂肪酶基因ProROL在毕赤酵母(Pichia pastoris)中的高效表达

作者：郭勇亮; 喻晓蔚; 徐岩

来源：工业微生物, 2013, 43(02): 22-27.

• 米根霉脂肪酶
• 毕赤酵母
• 高效表达

米根霉(Rhizopus oryzae)脂肪酶在食品和油脂加工等方面具有广泛的应用前景。本研究通过PCR技术获得了米根霉脂肪酶前肽基因序列与成熟肽基因序列(ProROL),并将该基因克隆到表达载体pPIC9K上。线性化表达质粒后电转化感受态毕赤酵母菌株(Pichia pastoris)GS115,通过筛选得到了阳性重组菌。摇瓶及7 L罐发酵结果显示,以p-NPP为底物,上清胞外酶活分别为10.6 U/mL和126.8 U/mL。酶学性质研究发现,该酶的最适温度为40℃左右,在低于40℃条件下,保温30 min后,能够保存60%以上的酶活力;其最适pH为8.5左右,在pH 6.0-10.0范围内保持1 h后,均能保留60%以上的酶活力。本研究构建的基因重组菌株将为该酶的工业化生产与应用提供一定的理论基础。

• 单位
  食品科学与技术国家重点实验室; 江南大学