CRE-decoy ODN对慢性吗啡诱导SK-N-SH细胞CCK及fosB mRNA表达上调的抑制作用

作者：苏彦君; 丛斌; 张国忠; 张瑾; 姚玉霞; 李淑瑾; 付丽红

来源：中国病理生理杂志, 2005, (04): 630-635.

• 吗啡
• SK-N-SH细胞
• CRE-decoyoligodeoxynucleotide
• 胆囊收缩素
• 基因,fosB

目的:研究以转录因子cAMP反应元件结合蛋白(CREB)为靶点的CRE -decoyODN对慢性吗啡诱导SK -N -SH细胞胆囊收缩素(CCK)及fosBmRNA表达上调的抑制作用。方法:体外合成含cAMP反应元件CRE序列TGACGTCA的单链寡核苷酸,将自身杂交形成发卡结构。将终浓度为15 0nmol/L的CRE -decoyODN与SK -N-SH细胞孵育1h后,加入终浓度为10 0 μmol/L的吗啡作用4 8h ,随后加入终浓度为10 μmol/L的纳络酮,戒断15min。采用电泳迁移率改变分析(EMSA)检测CRE -decoyODN与CREB结合的序列特异性及其对慢性吗啡诱导的CREB的DNA结合活性升高的影响;细胞掺入的CRE -decoyODN用酚:氯仿法提取,经2 0 %非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳及放射自显影检测;采用RT -PCR检测CCK及fosBmRNA表达。结果:慢性吗啡作用及纳络酮急性戒断使SK-N -SH细胞CREB的DNA结合活性、CCK和fosBmRNA表达明显升高,CRE -decoyODN可特异抑制其升高。结论:CRE -decoyODN通过特异抑制慢性吗啡诱导SK -N -SH细胞CREB的DNA结合活性而下调CCK及fosBmRNA表达。

• 单位
  河北医科大学