叠氮溴化丙锭-qPCR法定量检测植物乳杆菌

作者：马丹; 杨彬彬; 陶文靖; 郭敏卓; 张捷; 魏咏新; 李丹; 魏海燕; 曾静^*

来源：食品安全质量检测学报, 2021, 12(12): 4867-4875.

DOI：10.19812/j.cnki.jfsq11-5956/ts.2021.12.024

• 叠氮溴化丙锭
• 植物乳杆菌
• 实时荧光定量PCR

目的将叠氮溴化丙锭(propidiummonoazide,PMA)与实时荧光定量聚合酶链反应(real-time fluorescencequantitativepolymerasechainreaction,qPCR)相结合,建立一种活性植物乳杆菌定量检测的PMA-qPCR方法。方法首先进行引物探针特异性验证,优化PMA反应条件,建立标准曲线,验证灵敏度,然后将该方法用于检测人工添加奶粉、米粉、酸奶样品以及冻干样品中的植物乳杆菌。结果最佳PMA浓度为2μg/mL,最佳曝光时间为10 min,建立的PMA-qPCR方法可以快速、高效、特异地检测植物乳杆菌,利用细菌纯培养物与对应Ct值建立标准曲线,可以看出纯培养物浓度与Ct值之间存在对应线性关系,相关系数(r2)为0.9992,最低检测限为15拷贝/反应体系,人工添加样品以及冻干样品检测中PMA-qPCR和平皿计数法结果的对数值进行配对t检验,显示在不同的人工添加样本以及冻干样品中均无显著性差异(P>0.05)。结论本研究建立的PMA-qPCR检测方法能快速、准确、特异、灵敏地定量检测活性植物乳杆菌。

• 单位
  优合集团有限公司; 北京美正生物科技有限公司