两质粒系统重配甲型H1N1流感病毒株的研究

作者：周珊珊; 杨晓岚; 孙芳; 程晋霞; 谷宏婧; 段跃强; 杨鹏辉; 王希良

来源：免疫学杂志, 2018, 34(04): 353-358.

DOI：10.13431/j.cnki.immunol.j.20180055

• 反向遗传学
• 两质粒系统
• 流感病毒

目的构建两质粒冷适应流感病毒拯救系统,提高流感病毒的重配效率。方法本研究通过构建克隆载体pfastbac△plh HTB,将流感病毒A/Ann Arbor/6/60(H2N2)6个内部基因(PB2、PB1、PA、NP、M、NS)的双向转录表达元件定向克隆入此载体,获得pfastbac△plh HTBP6。同时将流感病毒A/California/7/2009(H1N1)表面基因(HA、NA)双向转录表达元件定向克隆入p ENTR-1A质粒,获得p ENTR-1AP2。将2个重组质粒共转染MDCK/COSI细胞,细胞上清接种10日龄SPF鸡胚,收取尿囊液,血凝实验筛选阳性株,并进行全面鉴定。结果本研究利用两质粒系统成功重配甲型H1N1流感病毒株,命名为TRG A/California/07/2009(H1N1)Vca,重配病毒株传代后HA效价为28,形态符合流感病毒典型特征,大小80120 nm,具有冷适应、温度敏感表型。结论两质粒流感病毒拯救系统为高效重配流感疫苗株提供了新策略。

• 单位
  军事医学科学院; 病原微生物生物安全国家重点实验室; 安徽医科大学