恶臭假单胞菌F1表达P450酶催化柠檬烯生物合成紫苏醇

作者：底心怡; 刘春立^*; 刘秀霞; 杨艳坤; 白仲虎^*

来源：食品与发酵工业, 2023, 1-9.

DOI：10.13995/j.cnki.11-1802/ts.035167

• 紫苏醇
• 细胞色素P450
• CymAab
• 恶臭假单胞菌
• 广宿主载体
• 萜类化合物
• 耐受度

紫苏醇是一种天然存在的单萜类化合物，在医药、日化、食品等行业具有广阔应用前景，但利用柠檬烯生物合成中的过程中存在选择性不强、底物对宿主菌株有毒性等问题。为此我们选择恶臭假单胞菌F1这种对环境具有高耐受度的菌株，构建在大肠杆菌和恶臭假单胞菌中皆可扩增并表达目的基因的广宿主载体，过表达选择性羟化酶CymAa、CymAb，异源表达特异性氧化柠檬烯生成紫苏醇的P450酶CYP153A6，并在表达P450酶的基础上对柠檬烯底物添加浓度进行了调整，与大肠杆菌BL21 (DE3)一同进行柠檬烯生物合成紫苏醇实验，并使用紫外可见分光光度计和GC-MS分别测量菌株生长状况和紫苏醇产量。最终，我们证明了恶臭假单胞菌F1在柠檬烯浓度为10 mmol/L内的环境中具有高耐受度，且添加1 mmol/L柠檬烯底物发酵48 h后获得最高产量75.6 mg/L，最高转化率达到49.66%，缩小了生物合成紫苏醇的底物添加范围，并获得对柠檬烯具有高耐受度的发酵宿主。

• 单位
  工业生物技术教育部重点实验室; 江南大学; 生物工程学院