BTLA蛋白胞外区片段的制备及鉴定

作者：毛丽伟; 倪兵; 姜曼; 黎万玲; 肖宇; 吴玉章

来源：免疫学杂志, 2005, (02): 100-103.

• BTLA
• RTPCR
• 克隆

目的　克隆人的BTLA蛋白分子的基因胞外区片段(ExtracellularregionofBTLA ,exBTLA) ,并在Flp InCHO系统表达、纯化,用于单克隆抗体的制备或直接进行功能研究。方法　用RT PCR方法制备exBTLA基因,以哺乳细胞高效表达质粒载体pSec WG为载体构建重组融合exBTLA IgFc pSec WG质粒。重组体经双酶切鉴定后,再通过测序鉴定克隆的正确性。采用脂质体法将重组质粒转染Flp InCHO细胞,G蛋白亲和层析法纯化蛋白。用Westernblotting检测BTLA基因胞外区表达的特异性。结果　正确构建了exBTLA pSec WG重组质粒,并在转染细胞所分泌的上清液中检测出了蛋白片段的表达。利用亲和层析法成功纯化出特异的exBTLA蛋白。结论　成功地构建了exBTLA pSec WG重组质粒,纯化出exBTLA蛋白,为下一步mAb制备及其功能研究提供实验依据。

• 单位
  第三军医大学