科研之友
微信
新浪微博
Facebook
分享链接
摘要
目的探讨趋化因子受体CXCR4在肾癌索拉非尼治疗耐药中的作用及可能的机制。方法 2014年1月至2016年6月将肾癌细胞786-0接种于裸鼠前肋侧皮下荷瘤,每点5×106个细胞,在移植瘤体积约100 mm3时,将裸鼠分为对照组和索拉非尼组,每组3只。索拉非尼组予索拉非尼(80 mg/kg,1次/d)灌胃,对照组予等量生理盐水灌胃。对照组第5周肿瘤体积即超过1 500mm3,切取肿瘤作为对照组织;索拉非尼组第8周肿瘤开始加速生长,至第13周肿瘤体积超过1 500mm3,取第13周肿瘤作为耐药组织。采用实时定量PCR、蛋白质印迹和免疫组化法检测对照组织和耐药组织中CXCR4的表达量。构建pcDNA3.1-CXCR4质粒,将其转染至786-0细胞中过表达CXCR4,实时定量PCR和蛋白质印迹法测定过表达效果。使用CCK-8和单克隆形成实验检测细胞的药物反应性变化,比较对照组、过表达组和抑制剂组(CXCR4过表达+CXCR4抑制剂AMD3100)的耐药性。蛋白质印迹法检测对照组、单用索拉非尼组、过表达CXCR4+索拉非尼组及过表达CXCR4+索拉非尼+AMD3100组786-0细胞存活关键分子PKB、ERK、STAT3的磷酸化情况。结果与对照组织相比,耐药组织CXCR4的mRNA水平升高(3.22±0.23)倍,蛋白质迹法检测结果显示蛋白表达量平均升高(2.33±0.47)倍,差异均有统计学意义(均P<0.01)。过表达CXCR4后,CXCR4的mRNA表达量升高了(78.3±5.3)倍,蛋白表达量升高了(2.80±0.95)倍,差异均有统计学意义(均P<0.01),过表达模型构建成功。用CCK-8法测定对照组、过表达组和抑制剂组对索拉非尼的药物反应性曲线,计算出IC50分别为(7.5±0.8)、(10.3±0.7)、(5.7±0.6)μmol/L,差异有统计学意义(P<0.05)。在索拉非尼7.5μmol/L作用下,对照组、过表达组和抑制剂组形成的克隆数分别为(26±5)、(56±12)、(42±9)个,差异有统计学意义(P<0.05)。索拉非尼可以降低PKB、ERK、STAT3的磷酸化,而过表达CXCR4可以逆转索拉非尼对PKB、ERK、STAT3磷酸化的抑制,使用AMD3100抑制CXCR4活性后,PKB、ERK、STAT3磷酸化又重新被抑制。结论 CXCR4可以促进肾癌索拉非尼耐药,并且CXCR4在继发性耐药的肿瘤组织中表达量升高;CXCR4可能通过活化细胞的促存活通路导致耐药;抑制CXCR4信号通路有望提高索拉非尼治疗肾癌的效果。
-
单位长征医院; 中国人民解放军第二军医大学
