一种基于定量PCR的CRISPR/Cas9基因编辑作物快速检测方法的研究

作者：张笑天; 王智; 朱鹏宇; 魏霜; 付伟; 黄春蒙; 李志红; 王慧煜; 焦悦^*

来源：生物技术进展, 2023, 13(06): 907-912.

DOI：10.19586/j.2095-2341.2023.0080

• 基因编辑水稻
• qPCR
• 分子检测
• CRISPR/Cas9

基因编辑技术自诞生以来，在作物育种、基因功能分析中得到了广泛的应用，其中CRISPR/Cas9系统是目前使用最多的基因编辑技术。基于荧光定量PCR技术，针对编辑位点设计特异性探针，结合基因组快速提取方法和成熟的水稻内参基因PLD引物，对自行研发的CRISPR/Cas9系统编辑水稻的Os11N3基因进行检测，并通过合成质粒模拟不同突变情况对该方法的特异性进行了验证。研究所建立的体系可在节约时间和成本的同时获取满足qPCR检测所需的基因组，能够区分1 bp基因编辑突变体与野生型，具有良好的特异性和灵敏度。检测方法可为作物育种筛选节省时间和成本，为基因编辑产品检测监管提供技术支持。

• 单位
  广州海关技术中心; 中国检验检疫科学研究院; 中国农业大学