miR-124-3p.2通过CMTM6调控口腔鳞状细胞癌细胞凋亡、铁死亡的机制研究

作者：杜姗姗; 叶双; 解龙川^*; 夏凌云

来源：河北医科大学学报, 2023, 44(03): 252-278.

• 肿瘤,鳞状细胞
• 细胞凋亡
• 铁死亡

目的 观察miR-124-3p.2对口腔鳞状细胞癌细胞凋亡、铁死亡的调控作用，探究此作用的潜在机制。方法 运用实时荧光定量逆转录聚合酶链式反应(real time fluorescence quantitative reverse transcriptase polymerase chain reaction, RT-qPCR)检测人正常口腔上皮细胞NHOK、口腔鳞癌细胞株Cal27、SCC-25、HSC-3和Tca8113中miR-124-3p.2、含CKLF样MARVEL跨膜结构域基因6(containing CKLF like MARVEL transmembrane domain gene 6,CMTM6)的表达，筛选最适细胞Cal27;脂质体法将NC组(不作任何处理)、miR-con组(转染miR-con)、miR-124-3p.2组(转染miR-124-3p.2 mimics)、si-con组(转染si-con)、si-CMTM6组(转染si-CMTM6)、miR-124-3p.2+pcDNA组(共转染miR-124-3p.2 mimics和pcDNA)、miR-124-3p.2+pcDNA-CMTM6组(共转染miR-124-3p.2 mimics和pcDNA-CMTM6)转染至Cal27;细胞计数试剂盒(cell counting kit, CCK8)法检测细胞增殖；蛋白免疫印迹(Western blot, WB)实验检测CMTM6、溶质载体家族7成员11(recombinant solute carrier family 7,Member 11,SLC7A11)、谷胱甘肽过氧化物酶4(glutathione peroxidase, GPX4)和铁蛋白重链1(ferritin, heavy polypeptide 1,FTH1)蛋白表达；免疫荧光法检测活性氧(reactive oxygen species, ROS)含量；流式细胞术检测细胞凋亡；双荧光素酶报告实验检测细胞荧光活性。结果 与NHOK相比，Cal27、SCC-25、HSC-3细胞中miR-124-3p.2表达降低，CMTM6的表达均升高(P<0.05);miR-con组、miR-124-3p.2组不同组间、时点间、组间·时点间交互作用下细胞活性比较差异有统计学意义(P<0.05),与miR-con组相比，miR-124-3p.2组细胞ROS显著升高，SLC7A11、GPX4和FTH1的蛋白表达均显著升高，细胞凋亡率显著升高(P<0.05),miR-124-3p.2组CMTM6-WT细胞荧光活性显著降低，anti-miR-124-3p.2组CMTM6-WT细胞荧光活性显著升高(P<0.05);si-con组、si-CMTM6组不同组间、时点间、组间·时点间交互作用下细胞活性比较差异有统计学意义(P<0.05)。miR-124-3p.2+pcDNA组、miR-124-3p.2+pcDNA-CMTM6组不同组间、时点间、组间·时点间交互作用下细胞活性比较差异有统计学意义(P<0.05)。结论 miR-124-3p.2促进OSCC细胞凋亡和铁死亡，这可能与靶向CMTM6有关。

• 单位
  湖北医药学院; 湖北省十堰市太和医院