水牛miRNA-155重组腺病毒载体的构建及生物信息学分析

作者：吴飞; 沈朋雷; 王露露; 陈维丽; 冯万有; 俸云; 卢嘉卡; 陆凤花^*; 石德顺^*

来源：中国兽医学报, 2020, 40(10): 1998-2006.

DOI：10.16303/j.cnki.1005-4545.2020.10.19

• 水牛
• miR-155
• 卵丘细胞
• 生物信息学
• 腺病毒载体

旨在利用Admax系统构建miRNA-155的腺病毒表达载体,获得含有miR-155的腺病毒颗粒,同时对miR-155的预测靶基因进行生物信息学分析,为研究水牛卵丘细胞中miRNA-155的功能奠定基础。根据GenBank中牛的序列,通过RT-PCR扩增得到pri-miRNA-155序列,并连接到腺病毒载体pDC316-mCMV-EGFP,测序并进行生物信息学分析。将pDC316-mCMV-EGFP-pri-miRNA-155与pBHGloxdelE13cre在HEK-293细胞中包装获得Ad-miRNA-155病毒颗粒,感染水牛卵丘细胞后,利用RT-qPCR技术检测miRNA-155及部分靶基因表达量。TargetScan网站预测获得miRNA-155的靶基因,并利用KOBAS 3.0对预测靶基因进行GO和KEGG富集分析。结果表明,成功构建腺病毒重组载体pDC316-mCMV-EGFP-pri-miRNA-155,水牛pre-miR-155与黄牛、马、家兔、原鸡、猕猴、狼、树鼩的同源性均达95%以上,且miR-155在进化过程中高度保守。Ad-miR-155感染水牛卵丘细胞后,miR-155的表达水平显著上升(P<0.01),预测靶基因Wee1、CD44、TRPS1表达水平显著降低(P<0.01)。最后对miR-155预测靶基因进行生物信息学分析发现,miR-155可能通过PI3K-AKT、mTOR及MAPK等信号通路作用于卵丘细胞进而调控水牛卵母细胞体外成熟。

• 单位
  广西大学; 亚热带农业生物资源保护与利用国家重点实验室