利用CRISPR/Cas9技术构建FSTL1基因敲除的SiHa细胞稳定株

作者：张红; 胡晓霞^*; 洛若愚; 陈欢; 李梦如; 杨琅

来源：中国临床新医学, 2019, 12(08): 842-846.

• CRISPR/Cas9
• 卵泡抑素样蛋白1
• 基因敲除
• SiHa细胞

目的利用CRISPR/Cas9技术敲除SiHa细胞中的卵泡抑素样蛋白1(FSTL1)基因,构建FSTL1基因敲除的SiHa细胞稳定株。方法构建sgRNA-FSTL1重组质粒并包装成慢病毒。收集病毒液并感染SiHa细胞,使用嘌呤霉素筛选FSTL1基因敲除的SiHa细胞稳定株;采用RT-qPCR和Western blot检测SiHa细胞稳定株FSTL1 mRNA和蛋白的表达情况。结果 FSTL1-sgRNA慢病毒构建成功并筛选出FSTL1基因敲除的SiHa细胞稳定株;FSTL1的mRNA和蛋白表达水平在SiHa细胞稳定株中的表达量均比对照组低,差异有统计学意义(P<0.05)。结论利用CRISPR/Cas9技术成功构建FSTL1基因敲除的SiHa细胞稳定株。

• 单位
  广西壮族自治区人民医院; 武汉大学人民医院