基于微生物法检测生物素的原理,建立了一种应用96孔微孔板代替国标方法中玻璃试管的大通量检测生物素的方法。采用该方法测定婴幼儿配方乳粉中生物素的含量,标准曲线相关系数为0.997,重复性实验相对标准偏差在1.30%2.38%,加标回收实验回收率在100%103%。与GB 5009.259—2016分析方法比,2种方法所测的生物素含量差异不显著(p>0.05),且该方法简化了操作步骤、降低了成本,更适合各检测实验室应用。