耻垢分枝杆菌培养方法及抗酸染色初染方法的优化改良

作者:郭亚豪; 李玲*; 万金磊; 康子乾; 顾加群; 黄继炜; 侯隽
来源:中国组织化学与细胞化学杂志, 2022, 31(01): 68-73.
DOI:10.16705/j.cnki.1004-1850.2022.01.011

摘要

目的 评价3种常见培养基及抗酸染色6种初染方法在耻垢分枝杆菌培养与染色鉴定中的优缺点,筛选适于耻垢分枝杆菌生长的最佳培养条件,并对其染色鉴定方法进行优化。方法 分别以液体营养肉汤(静置、晃动培养),固体血琼脂、普通营养琼脂培养基培养耻垢分枝杆菌24 h、48 h、72 h,对比生长情况;将抗酸染色法中石碳酸复红染色步骤分别以常规加热、70℃水浴、微波炉低火、卫生纸覆盖、室温冷染、及37℃温箱孵育等方法操作,对比染色效果与石炭酸复红用量。结果 相同时间内,耻垢分枝杆菌生长速度为:固体培养基培养>液体培养基晃动培养>液体培养基静置培养,3种培养基培养48 h时均可获得理想菌量。与常规加热抗酸染色法相比,70℃水浴法、微波炉低火法着色清晰鲜艳,其他染色方法染色效果欠佳。石炭酸复红用量为:常规加热法> 37℃温箱孵育法>卫生纸覆盖法> 70℃水浴法=微波炉低火法。结论 普通培养基即可满足耻垢分枝杆菌营养要求,充足氧气有助于其快速生长;70℃水浴法和微波炉低火法优于传统染色加热法染色效果,且石炭酸复红染液用量少,可作为鉴定耻垢分枝杆菌的优化实验方法。

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