重组人心肌肌钙蛋白I单克隆抗体的制备及鉴定

作者：佟晓丽; 张春明; 王德芝

来源：生物医学工程与临床, 2009, 13(02): 149-152.

• 人心肌肌钙蛋白I
• 单克隆抗体
• 甲基纤维素半固体培养基

目的制备重组人心肌肌钙蛋白I(rhcTnI)的单克隆抗体,并对其单克隆抗体的特性进行鉴定。方法利用纯化后的rhcTnI作为免疫原,常规免疫Balb/c小鼠,取其脾细胞与同系骨髓瘤细胞Sp2/0进行常规融合,用甲基纤维素半固体培养基法获得单克隆抗体杂交瘤细胞株,利用ELISA、Western blot等方法对单克隆抗体的特性进行鉴定。结果筛选出3株稳定分泌抗rhcTnI的单克隆抗体杂交瘤细胞株,分别命名为4B3、7D5和3E6。3株单克隆抗体的免疫球蛋白亚类分别为IgG1(4B3、7D5)和IgG2b(3E6)。3株单克隆抗体与rhcTnI发生特异性结合,而与大肠杆菌菌体蛋白、乳酸脱氢酶(LDH)、肌酸激酶(CK)、肌酸激酶同工酶(CK-MB)无特异性交叉反应,3株单克隆抗体的亲和力常数分别为1.76×109L/mol、1.43×109L/mol和1.04×109L/mol。结论获得了效价高、特异性好的抗rhcTnI的单克隆抗体,为cTnI诊断试剂盒的研制奠定了基础。

• 单位
  放射医学研究所; 中国医学科学院; 中国协和医科大学