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摘要
目的基于网络药理学筛选丹参-红花药对配伍抗缺血性脑卒中的成分靶点、作用靶点,并对大脑中动脉阻塞(middle cerebral artery occlusion, MCAO)大鼠模型进行相关作用靶点的实验验证。方法 (1)通过系统药理学平台(Traditional Chinese Medicine Systems Pharmacology, TCMSP)、基因名片(GeneCards)数据库筛选丹参-红花的有效成分、成分靶点及缺血性脑卒中的相关靶点;运用STRING数据库构建蛋白互作网络图(protein protein interaction network, PPI),并利用生物信息分析软件(Cytoscape3.8.0)构建成分靶点互作网络;利用David在线分析工具对目标基因进行基因本体论(gene ontology, GO)富集分析和基因的京都百科全书和基因组(kyoto encyclopedia of genes and genomes, KEGG)通路分析。(2)采用改良MCAO法制备缺血性脑卒中大鼠模型,采用免疫组化法、实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)检测各组大鼠脑组织中NLR家族Pyrin域蛋白3(NLRP3)炎症小体和核转录因子-B(NF-kB)p65(NFkBp65)蛋白的阳性表达,探讨丹红配伍抗脑缺血损伤炎症反应的作用机制。结果 (1)丹参-红花药对中筛选出87个有效成分,253个靶点,缺血性脑卒中疾病靶点1 448个,药物与疾病相关靶点161个,通过GO分析得出730个生物学过程(biological process, BP),81个细胞组分(cellular component, CC),128个分子功能(molecular function, MF),通过KEGG分析得出127条信号通路。(2)免疫组化法和Real-time PCR测定结果显示,与假手术组比较,模型组大鼠脑组织中NLRP3炎症小体和NFkBp65蛋白表达明显增加(P<0.01),与模型组比较,丹红配伍组和尼莫地平组NLRP3炎症小体和NFkBp65蛋白表达明显降低(P<0.01)。结论丹红有效组分配伍能够通过NF-κB信号通路下调NLRP3炎症小体的释放,阻断炎症损伤环节,最终达到抗炎损伤的作用。
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