杂交油菜ISSR-PCR反应体系的建立和优化

作者：彭秉玉; 胡延萍; 巩爱岐; 王焕强; 王莉; 包天忠; 李瑞欣; 李毅

来源：植物研究, 2010, 30(05): 576-581.

• 杂交油菜
• ISSR-PCR
• 反应体系
• 正交试验设计 Hybrid Rapeseed
• reaction conditions
• orthogonal design

利用正交试验设计的方法,对影响ISSR-PCR反应的Mg2+、dNTP、引物和Taq DNA聚合酶4个因素进行优化试验,以期建立其最佳反应条件。并在此基础上,对DNA模板浓度和ISSR-PCR反应程序中的退火温度进行梯度筛选。结果表明:杂交油菜20μL ISSR-PCR最佳反应体系包括1.50 mmol.L-1Mg2+、0.125 mmol.L-1dNTP、2.00μmol.L-1primer、0.50 UTaqDNA聚合酶、2.5μL10×buffer和40 ng DNA模板;引物UBC891适宜的退火温度为54.2℃。该体系在青杂3号及其父本不同个体中能够扩增出条带清晰、稳定性好的条带。I...

• 单位
  中国科学院西北高原生物研究所; 华东理工大学; 青海省种子管理站