弧菌外膜蛋白OmpK多肽免疫原制备及其免疫原性研究

作者：高云山; 桑雨浓; 梁夏夏; 刘建欣; 王文彬^*

来源：江苏海洋大学学报(自然科学版), 2020, 29(02): 15-21.

• 弧菌
• 外膜蛋白OmpK
• 多肽免疫原
• 抗体

外膜蛋白OmpK在弧菌属中保守性大于79%,是有良好应用前景的诊断和疫苗抗原,但弧菌属保守并且暴露在膜外的OmpK肽段有限,多肽免疫原免疫效果相比完整蛋白可能更具优势。采用Protein蛋白序列分析软件分析弧菌外膜蛋白OmpK,筛选出2条在弧菌属内广泛保守,同时亲水性和表面暴露性较好的多肽P1和P2。将合成的多肽与BSA蛋白偶联制备成多肽免疫原,免疫BALB/c小鼠,制备抗血清。间接ELISA结果显示,2条多肽免疫原抗血清对OmpK蛋白的效价均达到1∶81 000,对弧菌菌体的效价P1-BSA免疫血清高于P2-BSA免疫血清。通过Western blot分析发现,多肽的抗血清均能与重组OmpK蛋白(27kDa)以及测试的7株副溶血弧菌和1株创伤弧菌全菌蛋白发生免疫反应,P1多肽抗血清与2株气单胞菌,P2多肽抗血清与3株肠杆菌,存在不同程度的交叉反应。结果表明,OmpK的P1和P2多肽是弧菌共有的抗原表位,免疫血清对菌体识别较弱的原因有待进一步研究。

• 单位
  江苏省海洋生物技术重点实验室