摘要
目的:探讨微小RNA-92a(miR-92a)和微小RNA-19b(miR-19b)对小鼠胰岛β细胞胰岛素基因表达的影响。方法:qPCR检测小鼠胰岛素瘤MIN6细胞内源性miR-92a和miR-19b的相对表达水平。将MIN6细胞分为对照组及实验Ⅰ、Ⅱ组(每组n=3),分别转染阴性对照miRNA(NC)、miR-92a和miR-19b,qPCR验证miRNAs的过表达,光学显微镜观察细胞形态,CCK8法检测细胞活力,qPCR、Western blot及免疫荧光检测胰岛素表达情况,生物信息学预测、双萤光素酶报告基因实验和Western blot分析miR-92a和miR-19b调控胰岛素表达的可能机制。结果:与成体胰腺祖细胞相比,MIN6细胞内源性miR-92a和miR-19b相对表达量显著降低(P<0.05);过表达miR-92a和miR-19b对MIN6细胞活力没有影响,但抑制胰岛素mRNA和蛋白表达;miR-19b显著抑制NeuroD1 3’UTR萤光素酶活性和NeuroD1蛋白表达(P<0.05),而miR-92a对NeuroD1 3’UTR萤光素酶活性和NeuroD1蛋白表达起到微调作用。结论:miR-92a和miR-19b抑制小鼠胰岛细胞胰岛素基因表达。
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