1α,25-二羟维生素D3通过NF-κB信号通路抑制肿瘤坏死因子-α诱导的人脐静脉内皮细胞活化

作者：周奕杉; 张庆燕; 蒋春明; 冯媛; 刘晶; 金波; 李楠; 张苗^*

来源：中华内分泌代谢杂志, 2019, (06).

• 1α,25-二羟维生素D3
• 内皮细胞活化
• NF-κB信号通路
• 黏附分子

目的 体外观察1α,25-二羟维生素D3[1α,25-(OH)2D3]对肿瘤坏死因子-α (TNF-α)诱导的人脐静脉内皮细胞(HUVECs)活化的影响,并探讨其机制。方法 体外培养HUVECs,采用血管细胞黏附分子(VCAM)、E选择素(E-selectin)作为内皮细胞活化标志物,以TNF-α(40 ng/ml),1α,25-(OH)2D3(10－8 mol/L)以及特异性NF-κB阻断剂SN50干预,Western印迹法、实时定量PCR(RT-PCR)法检测VCAM、E-selectin表达水平。在机制研究中,以NF-κB信号通路为切入点,分别采用Western印迹、RT-PCR、免疫荧光法、染色质免疫共沉淀(ChIP)法观察1α,25-(OH)2D3对其早期活化、核转运及与VCAM、E-selectin启动子结合的影响。结果 (1)Western印迹及RT-PCR显示TNF-α可明显上调HUVECs VCAM及E-selectin的表达,该效应可被特异性NF-κB阻断剂SN50抑制,1α,25-(OH)2D3可下调TNF-α诱导的VCAM及E-selectin的表达。(2)Western印迹显示TNF-α可诱导I-κBα磷酸化,从而活化NF-κB p65亚基。免疫荧光显示1α,25-(OH)2D3对NF-κB p65亚基核转运有明显抑制作用。ChIP法分析显示1α,25-(OH)2D3可抑制NF-κB p65与VCAM及E-selectin启动子的结合从而影响基因表达。结论 TNF-α通过NF-κB信号通路上调HUVECs VCAM和E-selectin表达,1α,25-(OH)2D3可抑制NF-κB早期活化、核转运及NF-κB p65与VCAM及E-selectin启动子的结合,进而抑制TNF-α诱导的内皮细胞活化。

• 单位
  南京大学医学院附属鼓楼医院