艾地骨化醇通过抑制CYR61的表达抑制骨肉瘤细胞的增殖和转移

作者：王海鹏; 陈明; 黄韬; 杨彤涛; 廖博; 韩先伟^*

来源：山西医科大学学报, 2023, 54(01): 38-47.

DOI：10.13753/j.issn.1007-6611.2023.01.006

• 艾地骨化醇
• 骨肉瘤
• 富含半胱氨酸蛋白61
• 肿瘤侵袭
• 细胞增殖

目的 探讨艾地骨化醇(eldecalcitol, ED-71)对骨肉瘤细胞增殖、转移和富含半胱氨酸蛋白61(CYR61)表达的影响。方法 首先，使用Lipofectamine 2000将CYR61过表达重组pcDNA3.1质粒(pcDNA3.1-CYR61组)及阴性对照pcDNA3.1质粒(pcDNA3.1-NC组)转染到人骨肉瘤细胞系(U2OS)中，通过RT-PCR和Western blot验证转染效率。然后，将U2OS细胞分为对照组、ED-71组、ED-71+pcDNA3.1-NC组和ED-71+pcDNA3.1-CYR61组，对照组和ED-71组细胞未进行转染，ED-71+pcDNA3.1-NC组细胞转染pcDNA3.1-NC,ED-71+pcDNA3.1-CYR61组细胞转染pcDNA3.1-CYR61。转染后，对照组细胞不做药物处理，其余3组细胞用含有5 nmol/L艾地骨化醇的1640培养基培养24 h。CCK-8法和集落形成实验测定U2OS细胞的增殖能力，流式细胞术检测细胞凋亡，Transwell实验检测细胞迁移和侵袭，RT-PCR检测细胞中CYR61 mRNA水平，Western blot检测细胞中CYR61、Bax、Bcl-2、MMP-2、MMP-9、Fibronectin、E-cadherin和N-cadherin的蛋白表达水平。结果 与pc-DNA3.1-NC组比较，pcDNA3.1-CYR61组细胞中CYR61的mRNA和蛋白表达水平升高(P<0.001)。与对照组比较，ED-71组中CYR61的mRNA和蛋白表达水平降低(P<0.001),OD450 nm值降低(P<0.001),集落数量降低(P<0.001),细胞凋亡率升高(P<0.001),Bax蛋白表达水平升高(P<0.001),Bcl-2蛋白表达水平降低(P<0.001),迁移和侵袭细胞数降低(P<0.001),MMP-2、MMP-9和Fibronectin蛋白表达水平降低(P<0.001),E-cadherin蛋白表达水平升高(P<0.001),N-cadherin蛋白表达水平降低(P<0.001)。与ED-71+pcDNA3.1-NC组比较，ED-71+pcDNA3.1-CYR61组U2OS细胞中CYR61的mRNA和蛋白表达水平升高(P<0.001),集落数量升高(P<0.001),OD450 nm值升高(P<0.001),细胞凋亡率降低(P<0.001),Bax蛋白表达水平降低，Bcl-2蛋白表达水平升高(P<0.001),迁移和侵袭细胞数升高(P<0.001),MMP-2、MMP-9和Fibronectin蛋白相对表达水平升高(P<0.001),E-cadherin蛋白表达水平降低(P<0.001),N-cadherin蛋白表达水平升高(P<0.001)。结论 艾地骨化醇通过抑制CYR61的表达抑制骨肉瘤细胞的增殖和转移能力。

• 单位
  中国人民解放军空军军医大学; 唐都医院