颅脑创伤动物血清预处理诱导型神经干细胞移植对补体活化的影响

作者：高谋; 徐如祥^*; 王文佳; 董勤; 丁柏匀; 姚慧; 杨志军

来源：中华神经创伤外科电子杂志, 2019, 5(04): 227-232.

DOI：10.3877/cma.j.issn.2095-9141.2019.04.009

• 诱导型神经干细胞
• 颅脑创伤
• Crry因子
• 补体调节分子
• 立体定向移植

目的研究颅脑创伤(TBI)动物血清预处理诱导型神经干细胞(i NSCs)立体定向移植对TBI后补体活化的影响。方法采用自由落体脑打击装置制备雄性成年C57BL/6小鼠TBI模型,将48只神经功能缺损评分(NSS)为4～8分的小鼠纳入TBI组,按照随机数字表法选取24只用于制备TBI小鼠血清和热灭活TBI小鼠血清,余下24只按照随机数字表法分为TBI小鼠血清预处理i NSCs(TBI-i NSCs)移植组(6只)、热灭活TBI小鼠血清预处理i NSCs(HITBI-i NSCs)移植组(6只)、磷酸盐缓冲液(PBS)预处理i NSCs(PBS-i NSCs)移植组(6只)和对照(Control)组(6只)。同时设置假手术(Sham)组(6只)。于TBI后12 h,用脑立体定向仪分别将含1×106个TBI-i NSCs、HITBIi NSCs、PBS-i NSCs单细胞悬液或等体积PBS移植到TBI小鼠脑内。于TBI后14 d处死动物,取脑组织行Western blot检测补体活化产物(C3d和C9)、补体调节因子Crry和细胞凋亡标记物active Caspase-3等蛋白表达水平;取脑组织行免疫荧光染色和原位末端标记(TUNEL)染色,观察TBIi NSCs、HITBI-i NSCs和PBS-i NSCs移植对TBI小鼠脑内NeuN抗体阳性和TUNEL阳性细胞数量的影响。结果 Western blot检测示:相比Sham组,PBS-i NSCs组、HITBI-i NSCs组、TBI-i NSCs组和Control组C3d、C9和active Caspase-3表达水平明显增高;而相比Control组,PBS-i NSCs组、HITBIi NSCs组和TBI-i NSCs组C3d、C9和active Caspase-3表达水平明显降低;相比PBS-i NSCs组和HITBI-i NSCs组,TBI-i NSCs组C3d、C9和active Caspase-3表达水平明显降低,组间差异具有统计学意义(P<0.05)。此外,相比Control组,PBS-i NSCs组、HITBI-i NSCs组、TBI-i NSCs组和Sham组Crry表达水平明显增高;相比Sham组,PBS-i NSCs组、HITBI-i NSCs组和TBI-i NSCs组Crry表达水平明显增高;相比PBS-i NSCs组和HITBI-i NSCs组,TBI-i NSCs组Crry表达水平明显增高,组间差异具有统计学意义(P<0.05)。免疫荧光染色和TUNEL染色示:PBS-i NSCs组和HITBI-i NSCs组NeuN抗体阳性和TUNEL阳性的细胞数量差异无统计学意义;然而,与PBS-i NSCs组和HITBI-i NSCs组相比,TBIi NSCs组NeuN抗体阳性和TUNEL阳性的细胞数量明显减少,组间差异具有统计学意义(P<0.05)。结论 TBI小鼠血清预处理i NSCs立体定向移植可上调TBI小鼠脑内Crry水平,抑制补体活化,减轻脑损伤。

• 单位
  神经内科; 解放军总医院; 首都医科大学附属复兴医院