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摘要
目的 分析辣蓼中性多糖（NPP）的单糖组成，评价其抗大肠杆菌性腹泻作用，并基于高通量转录组测序技术探讨其作用机制。方法 水提醇沉法制备辣蓼粗多糖，通过反复柱色谱分离纯化得到中性多糖组分NPP，采用1-苯基-3-甲基-5-吡唑啉酮（PMP）柱前衍生化-高效液相色谱（HPLC）法分析NPP单糖组成。雄性BALB/c小鼠随机分为正常对照组、模型组、模型+恩氟沙星5 mg·kg-1组、模型+NPP 40和80 mg·kg-1组。除正常对照组外，其余各组小鼠ip给予大肠杆菌菌液(1.0×1012CFU·L-1,10 m L·kg-1)，每日1次，连续8 d造摸；正常对照组小鼠注射同体积生理盐水。给药组于造模前2 d ig给药，每日2次，连续给药10 d；正常对照组和模型组小鼠ig给予等量生理盐水。HE染色观察小鼠十二指肠组织病理变化；高通量转录组测序技术分析正常对照组、模型组和模型+NPP组小鼠肠组织的差异表达基因（DEG），并对DEG进行GO功能富集和KEGG信号通路富集分析；采用实时荧光定量PCR（RT-q PCR）检测DEG m RNA表达量。结果 NPP主要由葡萄糖、半乳糖、阿拉伯糖及半乳糖醛酸组成，单糖在各自浓度范围内线性关系良好（R2≥0.9995），平均加样回收率为99.03%～102.41%，各单糖摩尔比为13.66∶10.33∶2.34∶1.00。HE染色结果表明，模型组小鼠十二指肠细胞水肿变性，少量细胞坏死或凋亡；模型+NPP组十二指肠组织结构清晰，仅见少量炎症细胞浸润。转录组测序结果显示，与正常对照组相比，模型组共筛选出1020个DEG；与模型组相比，模型+NPP组共筛选出960个DEG。GO功能分析显示，DEG主要富集于细胞过程、单有机体过程、代谢过程、细胞等生物学过程；KEGG通路分析显示，DEG主要富集于细胞因子-细胞因子受体相互作用通路、Toll样受体信号通路和趋化因子信号通路等炎症相关信号通路。RT-q PCR验证结果表明，选取的8个DEG的差异表达倍数趋势与转录组测序结果基本一致。结论 建立的PMP-HPLC方法简单可行、重复性好，可用于NPP的分析检测及质量控制。NPP对大肠杆菌性腹泻小鼠的受损十二指肠具有明显的修复作用，其作用机制可能与调控机体的趋化因子信号通路，Toll样受体信号通路等有关。
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单位国家中医药管理局; 广东药科大学
