大鼠心肌微血管内皮细胞培养及体外血管新生能力的检测

作者：陈琴; 黄铭涵; 江琼; 郑行春

来源：包头医学院学报, 2017, 33(11): 74-77.

DOI：10.16833/j.cnki.jbmc.2017.11.032

• 2型糖尿病
• 心肌微血管内皮细胞
• 血管新生

目的:建立稳定的大鼠心肌微血管内皮细胞（MMVECs）培养方法,观察来源于自发2型糖尿病GK大鼠以及血糖正常的Wistar大鼠MMVECs体外形成新生血管能力的差异。方法:3周龄的GK大鼠及Wistar大鼠,腹腔麻醉后快速留取左心室部分心肌,采用蛋白酶消化法,使用内皮细胞专用培养液EGM-2 MV Bulletkit,经差速贴壁分选进行MMVECs原代细胞培养。免疫细胞化学鉴定培养细胞Ⅷ因子相关抗原（v WF）表达,cell counting Kit-8（CCK-8）检测血管内皮细胞体外增殖能力,ECMatrix gel检测体外形成毛细血管网样结构的能力。结果:原代细胞培养7 d时,可见细胞呈团簇样生长,呈典型的"铺路石"或"鹅卵石"征;95%细胞可见内皮细胞特有的v WF表达;与Wistar大鼠相比,GK大鼠来源的MMVECs的增殖曲线低平,第2 d、3 d、4 d时,GK大鼠来源的MMVECs在450 nm处的OD值低于Wistar大鼠来源的MMVECs（t2 d=3.326、P2 d=0.029;t3 d=4.111、P3 d=0.015;t4 d=3.174、P4 d=0.034）;体外培养稳定传代的MMVECs均可在ECMatrix gel上形成管腔样结构,GK大鼠MMVECs形成管腔样结构的数量为（6.2±2.7）个,低于Wistar大鼠MMVECs的（14.2±5.3）个（t=2.973,P=0.018）。结论:本方法培养的MMVECs稳定、可靠,可用于自发糖尿病GK大鼠来源MMVECs体外血管新生功能的相关研究。在相同培养条件下,GK大鼠MMVECs体外形成新生血管的能力弱于Wistar大鼠MMVECs。

• 单位
  福建医科大学附属协和医院; 福建中医药大学