禽4型副黏病毒F基因的克隆及原核表达载体构建

作者：王雪竹; 伍晔晖; 陶乔孝慈; 刘建华^*; 张慧敏^*

来源：兽医导刊, 2023, (02): 1-5.

• 禽4型副黏病毒
• F基因
• 克隆
• 原核表达载体

扩增禽4型副黏病毒(Avian paramyxovirus type 4,APMV-4)新疆野鸭源分离株APMV-4/Pintail/CH(XJ)/01/2016的F基因，并构建原核表达载体。参考GenBank上公布的APMV-4序列，通过DNAStar设计F基因特异性引物，以APMV-4/Pintail/CH(XJ)/01/2016基因组RNA为模板，采用RT-PCR方法扩增F基因编码区，连接于pMD19-T载体，用BamHⅠ和HindⅢ酶切原核表达载体pET-30a重组质粒，将酶切产物克隆至pET-30a多克隆位点上，转化至大肠杆菌DH5α感受态细胞中，构建F基因原核表达载体，并对阳性重组质粒进行PCR和测序鉴定。结果显示，扩增出的片段大小为1701 bp,经测序鉴定该扩增片段为F基因全长，与GenBank中收录的APMV-4序列核苷酸相似性为99%;连接表达载体结果表明，原核表达载体pET-30a-F成功构建，为APMV-4诊断方法的建立提供了良好的技术基础。

• 单位
  新疆农业大学; 新疆农业职业技术学院