农杆菌介导鸡(土从)菌遗传转化体系构建

作者：张明星; 尹靖欣; 李丹妮; 许卓茗; 徐学锋^*

来源：食用菌学报, 2021, 28(05): 12-19.

DOI：10.16488/j.cnki.1005-9873.2021.05.002

• 鸡(土从)菌
• 遗传转化
• 农杆菌
• 潮霉素
• 共培养

采用含有双元质粒Plasmid4的3个农杆菌菌株(EHA105、GV3101和LBA4404)介导转化鸡(土从)菌(Termitomyces sp.)菌丝体,对转化体系相关的抗生素质量浓度、受体材料(菌丝球和菌丝块)、农杆菌菌株、农杆菌菌液浓度、侵染时间、共培养时间、共培养温度进行优化;并通过PCR鉴定转化子、荧光蛋白表达验证转化子的遗传稳定性。结果表明:潮霉素(hygromycin, Hyg)最适质量浓度为50μg·mL-1;菌丝球的转化效率优于菌丝块;EHA105菌液D600为0.7、侵染时间30 min、共培养时间48 h、共培养温度26℃时,鸡(土从)菌遗传转化效率最高。增强型荧光蛋白(enhanced green fluorescent protein, eGFP)的表达结果说明外源GFP基因已经成功整合到鸡(土从)菌基因组并获得高效稳定表达。构建的鸡(土从)菌高效转化体系为其后续相关功能基因研究和共生机制解析提供参考。

• 单位
  华南农业大学