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摘要
目的研究重组人糜蛋白酶(human Chymotrypsin)在大肠杆菌中的表达、纯化和部分性质。方法大肠杆菌BL 21(DE 3)高效表达目的蛋白,表达形式为包涵体,复性后的重组蛋白,通过阳离子交换层析纯化,对纯化蛋白进行性质研究。结果 SDS-PAGE分析重组蛋白酶原大小约为30KD,CM-FF阳离子交换层析纯化后最终活性回收率为93.7%,重组酶在pH 3pH5范围内稳定,温度稳定性好,以N-苯甲酰-L-酪氨酸乙酯(n-benzoyl-ltyrosine ethyl ester,BTEE)作为底物时的Km值为0.067mmol/L,紫外最大吸收波长为281nm。结论重组人糜蛋白酶工程菌成功表达目的蛋白,并通过复性、激活后获得了活性蛋白,建立了生产该酶的方法。
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单位华东理工大学; 生物反应器工程国家重点实验室
