高粱抗丝黑穗病基因SRAP体系优化

作者：段永红; 渠云芳; 王铭; 王长彪; 司浩浩; 张旭; 孙毅

来源：分子植物育种, 2017, 15(02): 611-617.

DOI：10.13271/j.mpb.015.000611

• 高粱
• SRAP-PCR
• 体系优化
• 正交设计

为建立高粱抗丝黑穗病基因最佳的SRAP-PCR反应体系,进一步筛选与抗病基因相关的SRAP标记。本研究采用单因素与正交设计相结合的方法,对影响高粱SRAP-PCR体系的5个因素Taq酶、Mg2+、模板DNA、d NTPs和引物进行优化,以期筛选出最优的高粱抗丝黑穗病基因SRAP-PCR反应体系。研究表明:在优化得到的20μL的高粱SRAP-PCR体系中,模板DNA的用量为20.0 ng,Taq DNA聚合酶的用量为0.14 U,Mg2+的浓度为3.0 mmol/L,d NTPs浓度为0.3 mmol/L,引物的浓度为0.5μmol/L。各因素对反应体系影响大小依次为:引物浓度>DNA用量>Taq DNA聚合酶浓度>Mg2+浓度=d NTPs浓度。本研究将为高粱抗性基因的定位与功能研究提供基础数据与技术支持。

• 单位
  山西农业大学; 农业部; 山西省农业科学院生物技术研究中心