Rac 3通过MAGEA6/AMPKα途径抑制肺腺癌A549细胞的自噬

作者：杜天宇; 肖旭阳^*

来源：锦州医科大学学报, 2021, 42(03): 5-10.

DOI：10.13847/j.cnki.lnmu.2021.03.002

• Rac 3
• CRISPR/cas9
• 自噬
• 肺腺癌

目的通过敲除与过表达肺腺癌A549细胞的Rac家族小GTP酶3 (rac family small GTPase 3,Rac 3)基因,探讨了Rac 3对A549细胞自噬的影响及机制。方法设计靶向人Rac 3的sg RNA,构建簇状规则间隔的短回文重复序列/簇状规则间隔的短回文重复序列蛋白9 (clustered regulatory interspaced short palindromic repeat/cas9,CRISPR/cas9)敲除质粒并导入A549细胞,通过T7E1酶切、碱基测序及Western Blot验证基因编辑。EBSS诱导自噬,检测LC3和SQSTM-1/p62的表达评估自噬水平,caspase3活化水平评估Rac 3对凋亡影响,黑色素瘤抗原A6 (melanoma antigen A6,MAGEA6)、AMPKα、ERK1/2、AKT的表达探讨Rac 3影响A549细胞自噬的机制。结果通过CRISPR/cas9技术成功敲除A549细胞的Rac 3基因。Rac 3敲除后诱导自噬,LC3 II/I比值上升、SQSTM-1/p62水平下降,caspase3活化水平升高,MAGEA6表达下降,AMPKα及磷酸化水平上升,Rac 3过表达上述蛋白呈相反方向变化。结论 Rac 3通过MAGEA6抑制AMPKα的表达及磷酸化水平,进而抑制肺腺癌A549细胞的自噬和凋亡。

• 单位
  锦州医科大学