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摘要
目的 评价头孢他啶-阿维巴坦(CAZ-AVI)单用或联合多黏菌素E(COL)对临床分离的广泛耐药铜绿假单胞菌(XDR-PA)的体外抗菌活性。方法 采用微量肉汤稀释法和棋盘法设计测定CAZ-AVI和COL单用及联合使用时对16株临床分离XDR-PA的最低抑菌浓度(MIC),并计算联合抑菌浓度指数(FICI)。应用聚合酶联反应对XDR-PA进行4类β-内酰胺酶相关耐药基因检测〔A类：肺炎克雷伯杆菌碳青霉烯酶(blaKPC)、圭亚那超广谱β-内酰胺酶(blaGES)；B类：亚胺培南酶类β-内酰胺酶(blaIMP)、维罗纳整合子金属β-内酰胺酶(blaVIM)、新德里金属β-内酰胺酶(blaNDM)、德国亚胺培南酶类β-内酰胺酶(blaGIM)、圣保罗金属β-内酰胺酶(blaSPM)；C类：头孢菌素酶类β-内酰胺酶(blaAmpC)；D类：苯唑西林酶类β-内酰胺酶(blaOXA)〕。在含药平板上测定各菌株的耐药突变频率。采用菌落计数法绘制3株XDR-PA的时间杀菌曲线。建立生物膜体外模型,用四甲基偶氮唑盐(MTT)比色法检测CAZ-AVI和COL抑制生物膜的协同作用。结果 16株XDR-PA对CAZ-AVI的MIC值范围在1～128 mg/L,仅3株为耐药菌(MIC>8 mg/L)。CAZ-AVI与COL联合使用的FICI范围在0.312～1.000,4株菌为协同作用,其余12株为相加作用。3株CAZ-AVI耐药菌均含有B类耐药基因blaIMP和blaVIM,13株敏感菌携带的耐药基因均属于A、C或D类。CAZ-AVI、COL及两药联用的耐药突变频率对数分别为-4.81±0.88、-7.06±0.69和-9.70(-9.78,-9.53),3组间比较差异具有统计学意义(H＝33.601,P<0.001),且两两比较差异也均有统计学意义(调整后均P<0.05)。在杀菌曲线试验中,两药联合可使3株XDR-PA浮游菌数量降低均>6 log CFU/L,其中PA1819菌株浮游菌数量降低较单药作用时超过5.1 log CFU/L。生理盐水组、CAZ-AVI组、COL组及CAZ-AVI-COL组的生物膜活菌数量〔吸光度值(A490)〕分别为0.665±0.068、0.540±0.072、0.494±0.642和0.317±0.080,除CAZ-AVI组与COL组差异无统计学意义外(P＝0.109),其余各组两两比较差异均有统计学意义(均P<0.001)。结论 CAZ-AVI联合COL可以有效提高两药单用对XDR-PA的杀菌效应,减少耐药菌的产生,抑制生物膜的形成,是治疗XDR-PA感染的潜在方案。
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