检测柯萨奇病毒A组6、10、16型的多重荧光RT-PCR建立及应用

作者：谢席平; 黄莲珍; 刘让万; 何声福; 陈华云; 陈嘉昌; 汤链

来源：临床检验杂志, 2014, 32(10): 721-725.

DOI：10.13602/j.cnki.jcls.2014.10.01

• 手足口病
• 多重荧光RT-PCR
• 柯萨奇病毒A组6型
• 柯萨奇病毒A组10型
• 柯萨奇病毒A组16型

目的建立检测手足口病(HFMD)肠道病毒的多重荧光RT-PCR方法。方法用多重荧光RT-PCR技术对引起HFMD的3种常见人肠道病毒[柯萨奇病毒A组(CVA)6、10、16型]进行检测,用基因测序法进行验证,并以灭活的CVA6、CVA10、CVA16病毒标准株以及引起临床相似症状的病原体样本进行特异性和灵敏度分析。结果 322例临床疑似HFMD标本,经本多重荧光RT-PCR法检测出CVA16、CVA10和CVA6型阳性样本分别为81、16和9份(总阳性率32.9%),且与基因测序法结果完全符合。将多重PCR体系中c-MMLV逆转录酶的量增至5 U,Hot-Taq酶的量增至8.5 U,可使其扩增效率提升至单重PCR扩增水平。优化后的体系可扩增出CVA6、CVA10和CVA16型阳性病毒标准RNA的检测下限分别是10,5和1 TCID50/mL。结论建立了一种灵敏、特异、高效和高通量的检测HFMD肠道病毒的多重荧光RT-PCR法,为其快速诊断提供了新的实验方法。

• 单位
  赣县人民医院; 中山大学达安基因股份有限公司