犬瘟热病毒(CDV) RPA-SYBR Green Ⅰ 检测方法的建立与应用

作者：郝镯; 张珊珊; 李楠; 田多; 李吉平; 孟轲音; 万忠海; 穆玉堂; 李忠义; 王承宇^*

来源：中国兽医学报, 2021, 41(05): 905-910.

DOI：10.16303/j.cnki.1005-4545.2021.05.12

• CDV
• RPA SYBR GreenⅠ
• N基因
• 重组酶聚合酶扩增

为建立一种新型、稳定、可普遍应用的诊断犬瘟热病毒(CDV)的方法,将重组酶聚合酶扩增(recombinase polymerase amplification, RPA)与SYBR GreenⅠ相结合,根据CDV N基因序列中同源性相对较高的保守区设计1套标有生物素Biotin的特异性引物和1条标记dSpacer、C3 Spacer的特异性探针,优化反应条件和体系,分析其灵敏性及特异性,最后建立一种可以进行临床应用的,特异性检测CDV的RPA-SYBR GreenⅠ方法。结果显示,成功构建检测CDV的RPA-SYBR GreenⅠ方法,此方法的最佳反应条件为实验人员闭合手掌中孵育10 min,引物与探针的最佳比例为2∶1。该方法的最低检测下限为1×101～1×100 TCID50/mL,能够特异地检测出CDV。应用本方法检测临床样品的结果与ELISA、RT-PCR方法的结果一致。结果表明,本试验所建立的CDV RPA-SYBR GreenⅠ检测方法特异性强,灵敏度高,操作简单,可应用于临床。