新型冠状病毒核衣壳蛋白在卡介苗中的表达及鉴定

作者：闫迎春; 黄烁; 薛庆节^*

来源：国际生物制品学杂志, 2022, 45(01): 18-22.

• 新型冠状病毒
• 卡介苗
• 核衣壳蛋白

目的构建并鉴定表达新型冠状病毒核衣壳(nucleocapsid, N)蛋白的基因重组BCG。方法利用PCR技术从质粒pUC57-N(Kan+抗性)中获得新型冠状病毒N蛋白全长基因。将N基因连接到大肠埃希菌-BCG穿梭表达质粒pMV261, 进行酶切、PCR及测序鉴定。重组质粒经电转化导入感受态BCG, 通过蛋白印迹法鉴定目的基因在重组BCG中的表达。结果经过PCR扩增获得1 260 bp的N基因, 构建的重组表达质粒pMV261-N序列完整, 插入的基因片段与美国国家分子生物学信息资源中心报道的新型冠状病毒N蛋白全长基因的大小及序列一致。重组质粒能够在BCG中表达相对分子质量约为46 000的目的蛋白, 蛋白印迹法显示该蛋白能被抗新型冠状病毒N蛋白单克隆抗体识别。结论构建的重组BCG能稳定表达新型冠状病毒N蛋白, 为开发新型冠状病毒N基因重组BCG疫苗奠定了基础。

• 单位
  滨州医学院; 济宁医学院; 基础医学院; 第二临床医学院