鸡柔嫩艾美耳球虫和巨型艾美耳球虫双重PCR检测方法的建立

作者：范现成; 马峋; 张会军; 唐欢; 宋军科^*; 赵光辉^*

来源：动物医学进展, 2019, 40(02): 17-21.

DOI：10.16437/j.cnki.1007-5038.2019.02.003

• 鸡
• 柔嫩艾美耳球虫
• 巨型艾美耳球虫
• 双重PCR

为了建立一种能够快速实现对鸡柔嫩艾美耳球虫(Eimeria tenella)和巨型艾美耳球虫(E.maxima)同时进行检测的双重PCR方法,基于2种艾美耳球虫各自的ITS-1基因筛选2对特异性引物,对制备的阳性DNA样品进行PCR扩增,凝胶电泳检测结果显示,分别在约450bp和150bp处出现目的条带。对PCR反应中的退火温度、MgCl2浓度、DNA模板量等进行优化。结果表明,当退火温度为59℃、MgCl2浓度为2.5mmol/L、DNA模板量为2μL时,双重PCR扩增结果最佳。特异性检测结果显示,所建立的双重PCR对环形泰勒虫、羊巴贝斯虫、隐孢子虫和蓝氏贾第虫的扩增结果均呈阴性,表明建立的方法具有较高的特异性。成功建立了柔嫩艾美耳球虫和巨型艾美耳球虫双重PCR检测方法,为临床中鸡球虫病的快速诊断提供了一种可靠的检测方法。

• 单位
  西北农林科技大学