介导细胞迁移与转化的Cdc42下游效应子信号途径分析

作者：扶云碧; 郭甫坤

来源：癌症进展, 2014, 12(02): 159-166.

• Cdc42
• 效应子
• 细胞迁移
• 细胞转化

目的制备Cdc42定点突变体,检测各种突变体与Cdc42下游效应子的相互结合能力以及细胞迁移、转化活性,分析效应子对Cdc42诱导的细胞迁移与转化的影响。方法以含突变位点的多聚寡核苷酸为引物,通过PCR法合成Cdc42突变体。以Cdc42效应子为探针,通过下拉实验检测Cdc42突变体与Cdc42效应子的结合能力。通过transwell小室法检测表达Cdc42突变体的细胞的迁移能力。通过计数表达Cdc42突变体的细胞在软琼脂糖胶里形成的集落检测Cdc42突变体的细胞转化活性。结果活化的Cdc42(Cdc42F28L)能与所有被检测效应子(PAK1、WASP、IQGAP1、BORG3及PAR6B)结合。氨基酸100、160、183-184位点突变不影响Cdc42 F28L与任何效应子的结合,而其余突变选择性地影响Cdc42F28L与以上5个效应子结合。细胞的迁移活性不受Cdc42突变体与效应子结合能力的影响,但部分突变体抑制Cdc42F28L重建与细胞迁移能力相关的细胞骨架。细胞的转化活性受到突变体与部分效应子的结合能力的影响。一些突变体能抑制Cdc42F28L激活与细胞转化相关的转录因子c-Jun,但不抑制细胞的转化。结论效应子PAK1、WASP、IQGAP1、BORG3及PAR6B均非Cdc42(活化的Cdc42,即Cdc42F28L)诱导的细胞迁移所必需;PAK1及PAR6B为Cdc42诱导的细胞转化的必备效应子。Cdc42诱导的细胞骨架重建不足以引起细胞的迁移,Cdc42对c-Jun的激活不足以诱导细胞转化。Cdc42调节的细胞转化和迁移可能涉及到截然不同的信号途径,细胞转化和迁移可能都受到多个Cdc42效应子的协同调控。

• 单位
  广州市红十字会医院; 暨南大学