应用抑制性消减杂交技术克隆和筛选丙型肝炎病毒NS3蛋白反式激活基因1的反式调节基因

作者：纪冬成军王建军刘妍杨倩党晓燕王春花

来源：世界华人消化杂志, 2004, (04): 93-96.

• 反式激活
• NS3
• 丙型肝炎病毒
• 编码基因
• 反式调节基因
• 转染
• 基因差异表达
• 抑制性消减杂交
• 表达质粒
• 聚合酶链反应

目的:筛选与克隆丙型肝炎病毒(HCV)NS3反式激活基因1 的反式激活基因,了解其可能存在的调节功能线索. 方法:应用抑制性消减杂交(SSH)技术及生物信息学(bioin- formatics),技术筛选并克隆NS3TP1反式激活的新型靶基因. 以NS3TP1表达质粒pcDNA3.1(-)-NS3TP1转染HepG2细胞,以空载体pcDNA3.1(-)为平行对照,制备转染后的细胞裂解液,提取mRNA并逆转录为cDNA,经Rsa I酶切后, 将实验组cDNA分成两组,分别与两种不同的接头衔接,再与对照组cDNA进行两次消减杂交及两次抑制性聚合酶链反应(PCR),将产物与pGEM-Teasy载体连...

• 单位
  解放军第302医院