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摘要
目的探讨丁苯酞(NBP)对急性一氧化碳(CO)中毒大鼠血脑屏障(BBB)超微结构损伤的干预作用及其对紧密连接相关蛋白ZO-1、claudin-5表达的影响。方法按随机数字表法将144只健康雄性SD大鼠分为正常对照组、CO中毒组和NBP干预组,每组48只。采用高压氧舱吸入法建立急性CO中毒动物模型并给予高压氧舱治疗,正常对照组自由呼吸新鲜空气。NBP干预组大鼠于中毒2 h后灌胃NBP 60 mg/kg、每日2次,直至处死;正常对照组和CO中毒组灌胃等量纯橄榄油。各组分别于制模后1、3、7、14 d取4只大鼠,透射电镜下观察BBB超微结构改变,用免疫荧光标记及蛋白质免疫印迹试验(Western Blot)检测ZO-1和claudin-5的蛋白表达,用免疫荧光双标染色观察两种蛋白在脑组织中的定位关系,用线性回归分析两种蛋白的相关性。结果正常对照组大鼠BBB超微结构无明显异常,可见部分ZO-1和大量claudin-5阳性细胞。CO中毒组BBB超微结构严重损坏;脑组织ZO-1和claudin-5阳性细胞明显减少,中毒后1 d蛋白表达即较正常对照组明显降低(ZO-1蛋白:3.38±0.30比24.50±5.62,claudin-5蛋白:11.38±0.93比46.35±6.88,均P<0.05),14 d时仍维持在较低水平,与正常对照组比较差异有统计学意义(Z0-1蛋白:10.35±0.80比24.63±3.57,claudin-5蛋白:32.35±3.11比46.43±7.20,均P<0.05)。NBP干预可明显改善急性CO中毒导致的大鼠BBB超微结构改变;脑组织ZO-1和claudin-5阳性细胞明显增多,蛋白表达亦明显升高,分别于1 d、3d起明显高于CO中毒组(1 d ZO-1蛋白:7.57±0.69比3.38±0.30,3 d claudin-5蛋白:20.46±1.42比11.43±0.86,均P<0.05),并随时间延长呈升高趋势。免疫荧光双标染色结果提示,ZO-1和claudin-5蛋白不仅可以在同一细胞中共存,也可以在不同细胞中单独表达。线性回归分析显示,急性CO中毒大鼠脑组织ZO-1与claudin-5表达呈线性正相关(R2=0.917,P=0.022)。结论 NBP可能通过上调ZO-1和claudin-5蛋白表达维持急性CO中毒大鼠BBB结构和功能的完整性,进而减轻CO中毒引起的脑损伤。
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