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摘要
目的 用肽库筛选技术寻找与胰岛素受体结合的胰岛素位点。方法 用噬菌体随机环七肽库 ,与亲和于脂质体表面的鼠肝胰岛素受体亲和筛选 ,测定阳性噬菌体与胰岛素受体的亲和力 ,测定高亲和力克隆插入DNA序列 ,推断出融合于gⅢ蛋白末端环七肽的氨基酸残基序列。固相法选择性人工合成多肽配基YS ,测定多肽YS与胰岛素受体的亲和力。比较高亲和力短肽与胰岛素的结构特征 ,寻找胰岛素肽链的类似结构 ,推断与胰岛素受体结合的胰岛素位点。结果 经过三轮亲和筛选 ,选择 12个阳性克隆测序 ,三种短肽YS(CYIRSLRLC)、RL(CRPLLRDRC)、MN(CNFLYGILC)出现频率高 ,都含有较多Leu和Arg。合成肽YS与胰岛素受体有较高亲和力 ,Kd值为 4 3 1× 10 8L/M。结论 研究提示 ,胰岛素B链B11(Leu)、B15 (Leu)是与胰岛素受体的直接结合位点。
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单位四川大学华西医院
