前列腺癌LNCaP-AI+F细胞外泌体促进基质细胞WPMY-1功能活化

作者：范维肖; 雷琳; 李蕊; 刁艳君; 常亮; 杨柳; 马越云; 郝晓柯^*

来源：中国肿瘤生物治疗杂志, 2019, 26(03): 293-298.

• 前列腺癌
• LNCap-AI+F细胞
• 外泌体
• 迁移
• 侵袭
• WPMY-1细胞
• 肿瘤相关成纤维细胞

目的:探讨前列腺癌外泌体对基质细胞WPMY-1迁移和侵袭能力的影响及其作用机制。方法:超速离心法提取前列腺癌LNCaP-AI+F细胞上清中的外泌体,电镜观察外泌体的典型形态结构,Zetaview检测外泌体的粒径分布,Wb鉴定外泌体标志蛋白及其他相关蛋白。将WPMY-1细胞与前列腺癌外泌体(40μg/ml)共孵育后,激光共聚焦显微镜观察WPMY-1细胞对PKH67标记的外泌体的摄取情况,Transwell实验检测WPMY-1细胞迁移和侵袭能力,qPCR检测IL-8、PDGFB和MMP9等三种肿瘤相关成纤维细胞(cancer-associated fibroblast,CAF)分子表达水平,Wb检测EGFR和ERK1/2蛋白磷酸化水平。结果:电镜下可观察到典型茶托状外泌体结构,外泌体粒径分布集中在100 nm左右,其标志蛋白CD63和ALIX的表达证实了所提取颗粒为外泌体。此外,外泌体还表达EGFR、HER2和SRC等三种与前列腺癌进展相关的蛋白。WPMY-1细胞与外泌体共孵育后,共聚焦显微镜下可看到该细胞摄取大量外泌体,明显促进WPMY-1细胞的迁移和侵袭能力(均P<0.01);与对照组比较,外泌体(40μg/ml)处理后WPMY-1 IL-8、PDGFB及MMP9表达水平增高(P<0.05或P<0.01);且外泌体促进了WPMY-1细胞EGFR和ERK1/2的磷酸化(P<0.01)。结论:前列腺癌细胞可通过外泌体作用于基质细胞WPMY-1,使其高表达多种CAF相关分子,促进EGFR和ERK1/2的磷酸化,增强其迁移和侵袭能力。

• 单位
  西京医院; 中国人民解放军空军军医大学