双芽巴贝斯虫TaqMan实时荧光PCR检测方法的建立

作者：刘启生; 王振宝; 曹雯丽; 杜晓杰; 哈森; 刘绪斌; 巴音查汗

来源：中国兽医学报, 2014, 34(05): 747-750.

DOI：10.16303/j.cnki.1005-4545.2014.05.019

• 双芽巴贝斯虫
• 实时荧光PCR
• 检测
• TaqMan探针

根据双芽巴贝斯虫(Babesia bigemina)18SrRNA基因的保守序列,设计特异性引物和TaqMan探针,建立了检测双芽巴贝斯虫的实时荧光PCR方法。该方法灵敏度高,最小检出量为1.1×101 copies/μL的标准质粒,比常规PCR灵敏1 000倍;重复性好,组内和组间重复性试验的变异系数分别为0.21%1.14%和0.31%1.50%,均小于2%;特异性强,对牛常见的其他两种血液原虫和健康血液无交叉反应。用建立的实时荧光PCR和常规PCR分别对30份临床样品进行检测,实时荧光PCR和常规PCR的检出率分别为30%和16.7%。结果表明,本研究建立的荧光TaqMan实时荧光PCR方法可以灵敏、准确、快速检测双芽巴贝斯虫感染,将为蜱传牛梨形虫病的流行病学调查和防制提供新的方法。

• 单位
  新疆农业大学; 伊犁出入境检验检疫局