miRNA-424(322)-5p通过激活Raf/MEK/ERK通路促进大鼠角膜新生血管形成

作者：曹浪; 李雪; 周善璧^*; 王豪

来源：第三军医大学学报, 2021, 43(17): 1650-1657.

DOI：10.16016/j.1000-5404.202103108

• miR-424(322)-5p
• 角膜新生血管
• Raf/MEK/ERK通路
• 人脐静脉内皮细胞

目的探讨microRNA-424(322)-5p[miR-424(322)-5p]在大鼠角膜新生血管(corneal neovascularization, Cor NV)形成中的作用及其可能机制。方法 20只雌性SD大鼠通过缝线法诱导构建大鼠Cor NV模型,左眼为实验组,右眼为正常对照组,收集建模第0、4、7、14天的角膜组织,通过HE染色、免疫组化(IHC)观察角膜结构、血管形成及蛋白表达;通过RT-PCR检测建模第4天的大鼠角膜组织中的miR-424(322)-5p及血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor, VEGF)mRNA的表达。通过脂质体转染人脐静脉内皮细胞(human umbilical vein endothelial cells, HUVECs),分为miR-424(322)-5p模拟物[miR-424(322)-5p mimic]组、阴性对照[miR-424(322)-5p NC]组、正常空白(CON)组,用RT-PCR检测miR-424(322)-5p转染效率,CCK-8、划痕实验、Transwell实验、Matrigel胶成管实验,分别检测各组HUVECs的增殖、迁移、成管能力;蛋白免疫印迹法(Western blot)检测VEGF及Raf/MEK/ERK通路的蛋白相对表达量。结果成功构建了大鼠Cor NV模型,HE染色切片显示:与正常对照组比较,建模后实验组第4、7、14天的大鼠角膜组织结构紊乱,角膜水肿增厚,新生血管形成,炎性细胞浸润;免疫组化(IHC)结果显示:与正常对照组比较,实验组VEGF的表达量明显增加,呈棕黄色;RT-PCR结果显示建模第4天后的大鼠角膜组织中miR-424(322)-5p及VEGF mRNA的表达显著增高(P<0.01)。通过脂质体转染HUVECs后的miR-424(322)-5p mimic组miR-424(322)-5p的表达量显著高于NC组和CON组(P<0.01),CCK-8、划痕实验、Transwell实验及Matrigel胶成管实验结果表明miR-424(322)-5p促进HUVECs的增殖、迁移及成管能力(P<0.01);Western blot结果显示VEGF及Raf/MEK/ERK通路的蛋白相对表达量明显上调(P<0.01)。结论 miR-424(322)-5p可能通过激活VEGF及Raf/MEK/ERK通路,促进HUVECs的迁移、增殖及成管能力,从而参与Cor NV的形成。

• 单位
  重庆医科大学附属第一医院; 重庆市涪陵中心医院; 贵州省人民医院; 重庆医科大学