摘要
【目的】本研究旨在建立鼠粉状饲料中抗菌肽NZ2114固相萃取-高效液相色谱(SPE-HPLC)快速分析方法,用于检测低、中、高浓度(2、10和50 g/kg)的鼠粉状饲料中受试物NZ2114含量,以分析抗菌肽NZ2114是否均匀分布。【方法】试验分别对提取条件、净化柱和净化方法进行优化,并考察了提取剂、提取时间对提取效率的影响,SPE清洗剂、洗脱剂等对回收率的影响。饲料样品经超声提取后离心,上清液经WCX固相萃取柱富集,随后用3 mL甲醇和5 mL 20%氨化甲醇进行净化洗脱。HPLC检测方法以ZORBAX Eclipse Plus C18作为固定相,0.1%甲酸-乙腈和0.1%甲酸-水作为流动相,柱温35℃,进样量20μL,以1.0 mL/min流速,按照梯度洗脱的方式洗脱,在波长276 nm下采用外标法定量检测饲料样品中NZ2114含量,并对该方法的线性、检测限与定量限、基质效应、回收率、日内与日间精密度进行考察。【结果】SPE-HPLC分析方法在62.5~4 000μg/mL浓度范围内线性关系良好,线性方程为y=0.9353x-32.721,相关系数(R2)为0.9996,低、中、高浓度下该方法的添加回收率范围在88.05%~111.23%,日内精密度为0.58%~4.45%,日间精密度为3.18%~6.37%,125、500和2 000μg/mL浓度下基质效应分别为1.02、1.01和0.99。【结论】本研究建立了鼠饲料中抗菌肽NZ2114的SPE-HPLC检测方法,符合方法学考察要求,具有灵敏度和精密度高、重现性好、快速等优点,能够实现3个浓度水平饲料样品中NZ2114的精准定量。
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