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摘要
黏性卵鱼类受精卵遇水后产生的黏性和卵壳变硬的现象严重影响着大批量显微注射操作的速度和随后的取材。研究建立了一种高效的黏性受精卵快速脱黏显微注射方法,并利用荧光标记葡聚糖Alex-Fluor488-dextran评估了消化脱黏、直接注射和脱壳注射三种方法的技术特点和适用范围。结果表明:在23℃,用0.25%胰蛋白酶(p H=7.1—7.4)消化4min可获得脱黏受精卵。与直接注射和脱壳注射方法相比,研究建立的消化脱黏方法兼具二者的优点:在受精后5min可以开始显微操作,无黏性,容易进针,胚盘清晰便于观察、注射后容易培养和取材。实验方法适用于研究与黏性卵鱼类卵子发生、卵-胚转换和早期胚胎发育密切相关基因的功能,亦可满足追踪受精过程中核质细微变化研究的需要。
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单位中国科学院水生生物研究所; 淡水生态与生物技术国家重点实验室
