摘要
目的 基于Wnt/β-catenin信号通路探讨益气解毒方(黄芪、黄连、白花蛇舌草等)对鼻咽癌5-8F细胞凋亡的作用机制。方法 (1)将5-8F细胞分为空白对照组、益气解毒方不同浓度组(0.25、0.5、1.0、2.0 mg·mL-1)及顺铂组(4μg·mL-1),采用实时无标记细胞功能分析仪(RTCA)监测细胞的增殖情况。(2)将5-8F细胞分为5组:空白对照组、益气解毒方1.0 mg·mL-1组、HLY78 10μmol·L-1组、HLY78 10μmol·L-1+益气解毒方1.0 mg·mL-1组、IWR-1 8μmol·L-1组,采用RTCA监测细胞的增殖;药物干预36 h后,采用Annexin V-FITC/PI双荧光染色法检测细胞凋亡率;JC-1荧光探针法检测细胞线粒体膜电位;Western Blot法检测细胞β-catenin、Wnt5a/b、Bcl2及Bax蛋白的表达水平。结果 与空白对照组比较,益气解毒方不同浓度组(0.25、0.5、1.0、2.0 mg·mL-1)的5-8F细胞增殖曲线均明显降低;益气解毒方1.0 mg·mL-1组、IWR-1 8μmol·mL-1组的细胞凋亡率显著升高(P<0.01),线粒体膜电位明显降低,β-catenin、Wnt5a/b及Bcl2蛋白表达明显下调(P<0.05,P<0.01),Bax蛋白表达显著上调(P<0.01),Bax/Bcl2比值显著升高(P<0.01)。与益气解毒方1.0 mg·mL-1组比较,HLY78 10μmol·L-1+益气解毒方1.0 mg·mL-1组的5-8F细胞增殖曲线明显升高,细胞凋亡率显著下降(P<0.01),线粒体膜电位明显升高,β-catenin、Wnt5a/b及Bcl2蛋白表达明显上调(P<0.05,P<0.01),Bax蛋白表达显著下调(P<0.01),Bax/Bcl2比值显著降低(P<0.01)。结论 益气解毒方能够抑制鼻咽癌5-8F细胞增殖,并诱导细胞凋亡,其机制与抑制Wnt/β-catenin信号通路相关。
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单位湖南中医药大学; 湖南中医药大学第一附属医院