人Notch2受体胞内区基因N2ICD的原核表达、纯化和鉴定

作者：陈中标; 李飞; 李佩婷; 邱晓媚; 叶健斌; 胡冰心; 宁立军; 宁云山; 李妍

来源：生物技术, 2016, (04): 335-340.

DOI：10.16519/j.cnki.1004-311x.2016.04.0058

• Notch2
• N2ICD
• 克隆
• 原核表达
• 纯化
• 鉴定 Notch2
• N2ICD
• cloning
• prokaryotic expression
• purification
• identification

[目的]构建含Notch2胞内区基因N2ICD的原核重组质粒,并在E.coli中表达。[方法]根据Gen Bank上N2ICD基因序列设计引物,用PCR从真核重组质粒p CMV-Tag4/N2ICD中扩增目的基因,克隆至携带GST标签的pGEX-4T-1原核表达载体中并转化E.coli BL21。异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达,收集菌体经反复冻融、溶菌酶破菌、超声破碎后,通过SDS-PAGE电泳检测目的蛋白的表达形式,表达产物经谷胱甘肽琼脂糖树脂glutathione sepharose 4B纯化并经Western Blot鉴定。[结果]PCR获取了目的基因人N2ICD,并成...

• 单位
  南方医科大学; 珠海南医大生物医药公共服务平台有限公司