基于CRISPR/Cas9技术构建Plcz1基因敲除小鼠模型

作者：曹彬彬; 蔡瑶; 王宝珠; 饶喻; 王超; 苟克勉; 王涛^*

来源：中国比较医学杂志, 2022, 32(07): 101-108.

• Plcz1
• CRISPR/Cas9
• 序列测定
• 基因敲除
• 小鼠

目的 利用CRISPR/Cas9系统构建精子特异性磷脂酶C zeta-1(phospholipase C zeta1,Plcz1)基因敲除(Plcz1-/-)小鼠模型，探讨Plcz1基因在雄性小鼠生育过程中的作用。方法 选择小鼠Plcz1基因第6、7外显子作为靶位点，前后两个位点设计2对sgRNA序列，再将2对sgRNA以Golden Gate方法插入pX330A质粒中，构建pX330-sgRNA重组质粒。经扩增、纯化后，将重组质粒显微注射进小鼠受精卵原核中，进行胚胎移植至代孕母鼠，F0代小鼠出生后，提取其尾DNA进行PCR鉴定和DNA测序分析。通过F0代与野生型小鼠交配得到F1代小鼠，F1代交配繁殖至F2代获得Plcz1基因缺失的小鼠纯合品系，Plcz1-/-与野生型小鼠交配，分析Plcz1-/-雄鼠的生育能力。结果 成功构建pX330-sgRNA重组质粒，通过繁育和测序筛选获得3只Plcz1-/-雄鼠(Plcz1m3、Plcz1m4、Plcz1m5),对3只小鼠进行目的基因测序发现：(1)Plcz1m3:Plcz1基因第6、7外显子区域缺失3078 bp;(2)Plcz1m4:第7外显子区域缺失7 bp,该小鼠在饲养过程中死亡；(3)Plcz1m5:Plcz1基因第6外显子区域缺失1 bp。结论 利用CRISPR/Cas9,成功获得Plcz1-/-雄性小鼠，Plcz1-/-雄性小鼠可育，但与野生型小鼠相比，其生育能力明显下降。

• 单位
  扬州大学