SYBR GreenⅠ实时PCR检测甲型H1N1与季节性流感病毒方法的建立

作者：李文悌; 孙菲; 王晓春

来源：中国人兽共患病学报, 2013, 29(01): 59-63.

• 甲型H1N1
• 实时荧光定量PCR
• SYBR GreenⅠ

目的建立一种检测甲型H1N1、季节性H1N1、H3N2与乙型流感病毒的SYBR GreenⅠ实时荧光PCR方法。方法设计针对甲型H1N1、季节性H1N1、H3N2与乙型流感病毒HA基因的引物,分别进行SYBR GreenⅠ实时荧光定量PCR反应,同时进行熔解曲线和Tm值分析,并作灵敏度和重复性试验。结果该方法与H5、H7、H9亚型流感病毒及副流感病毒1、2、3型均无交叉反应。构建的荧光定量标准曲线循环阈值与模板浓度呈良好的线性关系,扩增效率为:95.588%,检测灵敏度为101copies/反应体系,结果重现性好。成功地验证性检验了32份盲样标本。结论本研究建立的SYBR GreenⅠ实时荧光PCR方法敏感、不需荧光标记探针、成本低及高通量,能用于人类流感病毒的分型检测。

• 单位
  中南大学湘雅医学院; 湖南国际旅行卫生保健中心