生长因子受体结合蛋白2接头蛋白2缺失促进下肢动脉血管内皮细胞自噬的机制

作者：姚永杰; 李世伦; 朱经谱; 王预立; 张岚^*

来源：中华实验外科杂志, 2023, 40(05).

• 生长因子受体结合蛋白2接头蛋白2
• 自噬
• 内皮损伤

目的观察缺氧通过抑制血管内皮细胞生长因子受体结合蛋白2接头蛋白2(GAB2)的表达, 导致下肢动脉内皮损伤的分子机制。方法血管标本取材于上海交通大学医学院附属仁济医院血管外科, 粥样硬化股动脉标本取自于下肢动脉粥样硬化闭塞(ASO)截肢患者, 正常动脉血管取自于意外车祸截肢患者。通过组织免疫荧光(IF)、实时定量反转录聚合酶链反应(RT-qPCR)和蛋白质印迹法(Western blot)检测正常动脉血管与ASO病变动脉血管内膜组织中GAB2表达差异。采用RT-qPCR和Western blot检测缺氧条件下内皮细胞中微小RNA(miR)-30a及GAB2表达改变。内皮细胞中沉默或过表达GAB2后Western blot检测自噬标志物LC3 Ⅱ/Ⅰ的表达。组间比较采用t检验。结果组织免疫荧光(IF)和Western blot检测显示内皮细胞自噬水平ASO组织高于正常组织(5.252±0.449, t=15.950, P<0.01;1.805±0.210, t=5.471, P<0.01), 同时GAB2表达ASO组织低于正常组织(0.349±0.028, t=32.120, P<0.01;0.399±0.059, t=5.180, P<0.01);体外实验显示内皮细胞中GAB2表达缺氧组低于对照组(0.668±0.088, t=3.774, P<0.01);内皮细胞自噬标志物LC3 Ⅱ/Ⅰ水平沉默GAB2组高于对照组(1.197±0.036, t=9.376, P<0.01)。进一步机制研究结果显示, 内皮细胞中miR-30a表达量缺氧组高于对照组(2.349±0.118, t=9.257, P<0.01), GAB2 mRNA水平过表达miR-30a组低于对照组(0.207±0.040, t=6.031, P<0.01)。结论缺氧促进血管内皮细胞表达miR-30a, 通过降解GAB2 mRNA, 引起血管内皮细胞自噬水平升高, 导致动脉内皮损伤。

• 单位
  上海交通大学医学院附属仁济医院