催产素受体基因沉默的大鼠子宫平滑肌原代细胞模型的构建及鉴定

作者：荣翠平; 刘晓茜; 孙逸; 侯雪芹^*

来源：中国组织化学与细胞化学杂志, 2020, 29(06): 534-538.

DOI：10.16705/j.cnki.1004-1850.2020.06.008

• 原代培养
• 子宫平滑肌细胞
• 催产素受体
• 基因沉默
• 转染

目的建立催产素受体(oxytocin receptor,OXTR)基因沉默的细胞模型,为催产素受体相关的研究提供技术基础。方法设计3个阳性RNA干扰(RNA interference, RNAi)序列(Oxtr-RNAi-1、Oxtr-RNAi-2、Oxtr-RNAi-3)及一个阴性序列(con-RNAi),合成短发夹RNA(short hairpin RNA,sh RNA)干扰片段用于实验。以慢病毒为载体,构建绿色荧光蛋白(green-fluorescent protein,GFP)标记的Oxtr干扰体系。将Oxtr-RNAi慢病毒感染原代大鼠子宫平滑肌细胞,通过观察GFP荧光表达比较各组的转染效率,并用Western blot和荧光定量PCR分别检测OXTR蛋白和m RNA表达水平,来比较各组的干扰效率。结果慢病毒感染5d后,感染Oxtr-RNAi-1病毒的细胞GFP荧光表达细胞比例最高,OXTR蛋白和m RNA水平最低。结论成功构建了沉默Oxtr的子宫平滑肌细胞,为进一步研究催产素受体相关的分子机制奠定实验基础。

• 单位
  山东第一医科大学; 广东省中医院