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摘要
蛋白质研究已成为21世纪生命科学的焦点之一。定量蛋白质组学是探索疾病发生发展状况和寻找新药靶标的重要手段,近年来已经成为蛋白质组学研究的热点。目前,常用的蛋白质定量研究有:(1)基于双向凝胶电泳分离和光密度检测的研究策略;(2)基于同位素标记结合LC-MS/MS的研究路线。这些方法因试剂昂贵或仪器成本高而不易推广。为此,本文建立了一种基于多维校正的三维荧光检测平台,用于人血浆中目标多肽的定量分析。以血浆中还原型谷胱甘肽(GSH)和氧化型谷胱甘肽(GSSG)的定量为例,用二硫酥糖醇将GSSG还原成2分子GSH,在pH=8.0时,用邻苯二甲醛作为荧光探针与GSH特异性结合,生成具有强荧光的物质。在未经任何预处理的情况下,运用具有"二阶优势"的ATLD方法即可将血浆中GSH与其他内源性荧光物质的信号进行数学分离,并给出其在血浆中的浓度信息。定量结果与MRM相比较,无显著性差异。该方法简单、快速、无需任何样本预处理、成本较低,有望发展成为一种用于复杂体系中多肽定量的新方法。
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单位化学生物传感与计量学国家重点实验室; 湖南大学
