十三种致病菌多重PCR技术检测

作者：王大勇; 方振东; 谢朝新; 敖漉; 肖进文; 张春秀

来源：华中科技大学学报(医学版), 2011, (03): 320-325.

• 致病菌
• 多重PCR检测 pathogens
• multiplex PCR detection

目的探讨致病菌多重PCR检测方法。方法利用13种在突发公共事件中可能出现在饮用水水源水体中的致病细菌的特异性序列为靶序列,设计了14对特异性引物并分成3组进行多重PCR反应,建立并优化了多重PCR检测体系。结果通过实验确定适宜的退火温度为66~68℃;3组检测引物的添加比例分别为:第1组引物添加比例为Shi∶Sa∶O157∶Ec∶Sen=1∶1∶1∶2∶3~1∶1∶1∶3∶4,第2组引物添加比例为Lm∶Lp∶Kp∶Hp=1∶1∶4∶1,而第3组引物添加比例为MT∶VC∶BA∶YP∶16S=8∶1∶8∶4∶4;混合引物的用量为0.6~0.8μL。多重PCR的基因组DNA检测灵敏度可达到2×10-2ng/μL;配合浓缩集菌设备,使用研究中建立的多重PCR体系,肠炎沙门菌培养液的检测下限可以达到103cfu/mL。结论该多重PCR检测方法操作简单,速度快,灵敏度高,稳定性和重复性好,具有较广阔的应用前景和较大的经济与社会效益。

• 单位
  上海生物芯片有限公司; 生物芯片上海国家工程研究中心; 中国人民解放军陆军勤务学院